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赢彩天下药物分析-中药制剂分析

发布日期:2019-10-23 05:53   来源:未知   阅读:

  药物分析-中药制剂分析_幼儿读物_幼儿教育_教育专区。第十四章 中药制剂分析 第十四章 内容 1、了解中药制剂的分类及中药制剂 分析的特点 2、熟悉中药制剂分析的一般程序 3、掌握中药制剂常用的定量分析方 法 第一节 概述 一、定义 中药制剂是根

  第十四章 中药制剂分析 第十四章 内容 1、了解中药制剂的分类及中药制剂 分析的特点 2、熟悉中药制剂分析的一般程序 3、掌握中药制剂常用的定量分析方 法 第一节 概述 一、定义 中药制剂是根据药典、制剂 规范和其它规定的处方,将中药 的原料药物加工制成具有一定规 格,可以直接用于防病、治病的 药品。 注意:中药制剂必须是以中医 药基础理论和用药原则为指导 制成的单方或复方制剂。中药 的成方制剂又称为中成药。 二、中药制剂分析的特点 1. 中药市场混乱 同物异名 同名异物 贯众 (30多种,鳞毛蕨科、蹄盖蕨科、 紫萁科、乌毛蕨科) 同物异名现象严重: 重楼为百合科Paris polyphylla Smith. 的根茎又名 七叶一枝花、蚤休、草河车。 拳参为蓼科Polygonum bistra L.的根茎又名草河车。 2. 中药材质量的不稳定性 生长环境、采收季节及部位差异 GAP 中药材生产质量管理规范 麻黄 东北→西北(-)麻黄碱含量↑ (+)麻黄碱含量↓ 丹参酮 11、12月份含量最高 薄荷脑 秋季叶变黄时含量最高 益母草 水苏碱 营养期含量最高 益母草碱 营养期含量最低 不同部位人参皂苷的含量 重量比(%) 总皂苷含量(%) 周皮 6.9 2.60 韧皮 46.6 3.04 木质部 46.5 0.31 3. 各种有效成分在中药中含量 相差悬殊 五倍子 槐米 长春花 美登木 鞣质(>70%) 芦丁(>20%) 长春新碱(百万分之一) 美登木碱(千万分之一) 4. 成分复杂,而且大多数中药的 有效成分尚不十分清楚。 中药药效的发挥是多种成分 协同作用的结果,因此应从整体 上来控制中药的质量。 5. 同一成分在不同药材中的药理 作用不同 有效← →无效 鞣质 地榆(止血) 其他(无药效) 6. 制剂工艺不同,有效成分的量 也不同 例 三黄泻心汤干浸膏 有效成分与浓缩干燥方法的关系(%) 成分 常压 减压 逆浸透 浓缩 浓缩 喷雾 大黄酸葡萄糖苷 41.1 51.6 96.8 小檗碱 34.5 37.5 94.5 黄连碱 6.3 12.0 93.7 黄岑苷 77.4 77.6 98.5 7. 剂型繁多,辅料干扰大 丸、散、片、锭、合、酒、酊、 膏、露、茶、栓、颗粒、糖浆等 蜡丸 蜜丸 糊剂 曲剂 胶剂 蜂蜡 蜂蜜 糯米粉、黄米粉 发酵 豆油、黄酒、冰糖 针对不同的剂型,采用相应的 方法进行分离纯化后测定 二、 中药制剂的分类 中国药典(2000年版)一部(二十六种) 丸剂 胶剂 膏药 颗粒剂 滴眼剂 散剂 合剂 露剂 糖浆剂 软膏剂 片剂 酒剂 茶剂 滴丸剂 注射剂 锭剂 酊剂 搽剂 胶囊剂 滴鼻剂 栓剂 巴布膏剂 橡胶膏剂 气雾剂喷雾剂 煎膏剂(膏滋) 流浸膏剂与浸膏剂 (一)液体制剂 用药材提取物制备的液体制剂 合剂、糖浆剂、酒剂、茶剂、酊剂 滴鼻剂、滴眼剂、露剂、搽剂等 (无植物组织与细胞,故无显微鉴别) 1、 合剂与口服液 合剂系指药材用水或其他溶剂, 采用适宜方法提取,经浓缩制成的 内服液体制剂 (单剂量合剂也可称为“口服液”) 一般检查项目 pH 装量 相对密度 微生物限度 2、 酒剂与酊剂 酒剂 药材用蒸馏酒提取制成的澄清液 体制剂 酊剂 药物用规定浓度的乙醇提取或溶 解而制成的澄清液体制剂 一般检查项目 含乙醇量(GC) 甲醇量检查(GC) 总固体 装量 微生物限度 (二) 半固体制剂 软膏 药物、药材细粉、药材提取 物与适量基质混合制成的半 固体外用制剂 常用基质 油脂性、水溶性 乳剂型(乳膏剂) 检查项目 装量 微生物限度 (三) 半流体制剂 药材提取液的浓缩液 煎膏剂(膏滋) 流浸膏剂与浸膏剂(半流体或固体) (无植物组织与细胞,故无显微鉴别) 1、 煎膏剂(膏滋) 药材用水煎煮、去渣浓缩后,加炼 蜜或糖制成的半流体制剂 应无焦臭、异味,无糖结晶析出 检查项目 相对密度 不溶物 装量 微生物限度 2、 流浸膏剂与浸膏剂(半/固) 药材用适宜的溶剂提取,蒸去部分 或全部溶剂,调整浓度至规定标准 而制成的制剂 1ml流 浸膏 —— 1g 原药材 1g 浸膏 —— 2 ~ 5g 原药材 检查项目 装量 微生物限度 生产提取溶剂大多为水或稀醇 检测时一般需经有机提取后分析 (1)有效成分明确且有适当方法 ,测定 有效成分的含量 (2)有效成分不明或无定量方法的,可 测一定溶剂的浸出物含量 (3)对于流浸膏,有的测总固体量以控 制其质量 (四)固体制剂 药材提取物、药材粉末加赋 形剂、制备而成 丸剂、胶剂、颗粒剂、散剂、片剂、 胶囊剂、锭剂、胶剂、茶剂、栓剂 (有植物组织与细胞,可做显微鉴别) 1、 丸剂 指药材细粉或药材提取物加适宜的 黏合剂或其他辅料制成球形或类球形制 剂,分为蜜丸、水丸、水蜜丸、糊丸、 浓缩丸、蜡丸、微丸等 水分、重量差异(按丸或重量) 检查项目 装量差异(按一次剂量分装的) 溶散时限、微生物限度 水分规定 大蜜丸、小蜜丸、浓缩蜜丸 ≤15.0% 水蜜丸、浓缩水蜜丸 ≤12.0% 水丸、糊丸、浓缩水丸 ≤9.0% 装量差异 每 ?瓶 ?装 袋 ? 标 量示 ? 限 % 装 量 高 量 低 溶散时限 6丸,照崩解时限检查法 重量差异 第一法(按丸服用)每次最高丸数或每 丸(>1.5g),10份 W 最高 次 ? 丸 标 数 示 丸 ?最 重高 量 次 ?限 丸 % 量 数 高低 W 每 丸 ?标 示? 重 限量 % 量高 低 第二法(按重量服)每份10丸,10份 W10丸?平均重量或标 ?限示量 %重 高低 2、 散剂 一种或多种药材混合制成的粉 末状制剂,分内服和外用散剂 检查项目 均匀度 水分 装量差异 微生物限度 均匀度 取供试品适量置光滑纸上,平铺 约5cm2,将其表面压平,在亮处 观察,应呈现均匀的色泽,无花 纹、色斑 水分 ≤9.0% 3、 颗粒剂 药材提取物与适宜辅料或药材细 粉制成的颗粒状制剂,分为可溶性颗 粒剂、混悬性颗粒剂、泡腾性颗粒剂 粒度 水分 检查项目 溶化性 装量差异 微生物限度 粒度 >1号筛 <4号筛 ≤8%(左右轻轻往返3分钟) 溶化性 1g 0? 2 ? 倍 ? 0? ? 热 ? ? 水 搅 ? ? ? 5?拌 ? 溶 装量差异 单剂量包装 同丸剂 多剂量包装 最低装量检查法(附录Ⅻ C) 平均装量≥标示装量 每个装量≥限量% 4、 片剂 药材提取物加药材细粉或药材细 粉与适宜辅料混匀压制而成的园片状 或异形片状的制剂,分为浸膏片、半 浸膏片和全粉片 重量差异 检查项目 崩解时限 微生物限度 原粉片≤30′ 浸膏片≤1h 薄膜衣片≤1h 5、 胶囊剂 硬胶囊剂 软胶囊剂 肠溶胶囊剂 检查项目 水分 装量差异 崩解时限 微生物限度 第二节 中药制剂分析的一般程序 取样 提取 纯化 鉴别 检查 含量测定 一、 供试品溶液的制备 (一)提取方法 1、 萃取法 利用溶质在两种互不相溶的溶 剂中溶解度的不同,使物质从一种 溶剂转移到另一种溶剂中,将测定 组分提取出来的方法 (1)萃取溶剂的选择 正丁醇 —— 用于皂苷类 醋酸乙酯 —— 用于黄酮类 氯仿 —— 用于生物碱类 、石油醚 —— 用于挥发油 (2)水相pH的选择 酸性成分—— 比其pKa低1~2个pH单位 碱性成分—— 比其pKa高1~2个pH单位 (3)仪器和提取次数 鉴别——1次 分液漏斗 含量测定—— 3 ~ 4次 (4)酒剂和酊剂——先挥去乙醇 (5)防止和消除乳化 2、 冷浸法 样品置溶剂里,室温下浸泡一 段时间的提取方法 适用范围 适宜植物性粉末 不宜动物性粉末 适宜易溶出的组分 特点 适宜遇热不稳定的药物 费时(8 ~ 24小时) 亲脂性← → 亲水性 石油醚 苯 氯仿 乙酸乙酯 丙酮 乙醇 甲醇 水 3、 回流提取法 样品置有机溶剂中加热回流的 提取方法 加快溶出速度,省时 特点 适宜受热稳定的药物 适宜较难溶出的组分 仪器 普通回流装置 通过更换溶剂,使提取更完全 4、 连续回流提取法 样品置有机溶剂中加热,蒸发 的溶剂经冷凝流回样品管的提取方 法 节省溶剂,提高提取效率 特点 适宜受热稳定的药物 费时 仪器 索氏提取器 5、 水蒸气蒸馏法 适用于具挥发性的可随水蒸气 蒸出的组分的测定 麻黄碱、槟榔碱、丹皮酚、挥发油 6、 超声提取法 利用超声波的助溶作用进行提取 超声波振荡器(超声波清洗器) 简便 省时 提取率高 原理 超声波在液体中以疏密相间的形式 向物体辐射,出现“空化”现象(气泡 的 形成、产生及破裂现象),形成超过 7、 超临界流体萃取 (SFE法) 当压力和温度超过气体的临 界点时所形成的单一相态 超临界流体 是一种处于超临界点之上的流体, 是介于气体与液体之间的一种物相,兼 有气体与液体的一些特性 气体 T↓ 压力↑ 超临界流体 T↑ 压力↓ 气体 SFE 工艺流程 超临界流体萃取与化学法萃取相比有 以下突出的优点: (1) 它具有与液体相似的密度,因 而具有与液体相似的较强的溶解能力; (2)溶质在流体中的扩散系数与气 体相似,具有传质快,提取时间短的 优点; (3)超临界流体的表面张力为零, 易渗透到样品中,带走测定组分; (4)超临界流体在通常状态下为 气体,萃取后溶剂可立即变成气 体而逸出,易达到浓集的目的; (5) CO2是一种不活泼的气体, 萃取 过程不发生化学反应,且属于不燃性气 体,无味、无臭、无毒,故安全性好; (6) CO2价格便宜,纯度高,容易 取得,且在生产过程中循环使用,从 而降低成本; (7) 该技术易与其他仪器联用实现 自动化 (二)纯化方法 1、 萃取法 利用药物与杂质溶解性能 的不同进行分离 例 含生物? 碱 HH ? 2? O?? 样 ? 水 品 ? 弃 层 ? 生去 物碱盐 氨水 ??? 氯?仿 ?游 离 生 物? 2、 柱色谱法 (1)保留测定组分在柱上,洗去杂 质,再用适当溶剂洗下组分 (2)保留杂质于柱上 硅胶 常用固定相 氧化铝 大孔吸附树脂 二、 鉴别试验 鉴定有临床疗效的已知成分 黄连 麻黄 乌头 洋地黄 延胡索 小檗碱(抗菌消炎) 麻黄碱(支气管哮喘) 乌头碱(毒性) 强心苷(强心) 延胡索乙素(镇痛) (一)显微鉴别 (含生药粉制剂) 丸剂、片剂、胶囊剂、散剂 快速,简便,覆盖面大 选择原则 1、应选有专属性的特征进行鉴别 2、多来源的药材应选择共有的特征进行 鉴别 安宫牛黄丸 1、水牛角浓缩粉 2、麝香 3、珍珠 4、朱砂 5、雄黄 6、黄连 7、栀子 8、赢彩天下,郁金 9、黄芩 (二)化学鉴别 抗干扰能力差 组 分 ?试 ? ?剂 ?显色、↓、↑、荧光 例 二妙丸中苍术的鉴别 样? 乙 品 ? ? ? 醚 醚? 层 K ? ? M ? 4? 褪 nO 苍术酮 苍术炔 (三)色谱鉴别 TLC法——应用最多 (Rf、颜色、荧光) GC法 ——适用于含挥发性成分 的药物 HPLC法——常与含量测定同时进 行 阴、阳对照法 阳性对照 将要鉴别的药材按制剂 工艺处理,再按鉴别方 法提取的溶液 阴性对照 把制剂中要鉴别的药材 除去,用剩下的各味药 按制剂工艺处理,再按 鉴别方法提取的溶液 例 OO O OO OO OO OO × ×× 阴 样阳 对 品对 例 大补阴丸 黄柏的TLC法鉴别 O O O O O ××× 样 对照 小 品 药材 檗 碱 薄层板的选择 硅胶G板(可加0.3% ~ 0.5% CMC-Na) —— 多用 氧化铝板 —— 常用于生物碱类药物 聚酰胺板 —— 常用于黄酮类及酚类 药物 纤维素板 —— 常用于氨基酸类药物 (四)中药鉴别新技术-中药指 纹图谱 1. 定义: 2. 中药材或中药制剂经适当 处理后,采用一定的分析手段, 得到的能够标定该中药材或中药 制剂特性的共有峰的图谱 2. 色谱指纹图谱的基本属性 ? 整体性 将指纹图谱作为一个整体 来分析和比较它的综合特征以达到 鉴别的目的。 ? 模糊性 强调分析、比较指纹图谱 的相似性,而不是完全相同。 ? 是一种综合的、量化的色谱鉴别手 段。 色谱指纹图谱在中药质量评价中 能够尽可能多地反应中药的全貌。 不需要清楚每一个组分的化学结 构;不需要对每一个组分都进行 定量;只要求不同批号的同一种 药品的指纹图谱保持一致。 3. 指纹图谱的应用 味莲 雅雅莲莲 云云莲莲 I II III 诃子 小诃子 大诃子 绒毛诃子 人参须根 人参主根 不 同 产 地 高 良 姜 的 气 相 指 纹 图 谱 指纹图谱研究过程中的注意事项: 1、在药效学指导下进行研究,保证指 纹图谱反映的化学成分包括中药材 中有效部位所含的绝大部分成分或 有效成分的全部。 2、样品的预处理过程及测定方法应简 便、经济、易行,且专属性、准确 度与重现性好。 三、 杂质检查 水分 总灰分和酸不溶性灰分 主要项目 重金属 砷盐 残留农药 杂质来源及检查意义 水分 —— 结块、霉变或有效成分水解 灰分 —— 控制药物本身及泥土、沙石 等无机杂质 重金属 —— 环境污染和使用农药引入 砷盐 —— 剧毒,常由除草剂、杀虫剂 或化肥引入 残留农药—— 有毒 (一)水分测定法 烘干法(不含或少含挥发性成分) 甲苯法 (含挥发性成分) 减压干燥法(含挥发性成分贵重药) GC法 (二)总灰分和酸不溶性灰分的测定 总灰分的测定 供 试 ? 已 ? 品 ? △恒 ? ? 重 ? 炭 坩? 化 埚 5 ? 0 ? ~60 ? ? 0 ℃ ? 0 恒? 重 灰? 化 酸不溶性灰分的测定 总灰? 分 d? ?H ? ? C ? l过滤 ? 已 ?? 恒 △?重 ? ? 坩 灰化 ?炭化 ? (三) 重金属的测定 铅≤10ppm WHO规定植物药 镉≤0.3ppm 干法破坏 湿法破坏 硫代乙酰胺法 干法破坏(ChP) 供? 试 低 ? ? ? 炭 温 品 ? 5 ? 化 ? ~ 0 6 ? ? ℃ 0 0 ? 灰 0 HNO3 △ 第一 ? (调? H 到? 2 中O ? 性法 ) 蒸 ? ? 干 H ? △ ? C 蒸 l 湿法破坏(USP) 供? 试 凯 ? ? △ ? 氏 品 ? ?? O ?? 消 烧 ? 第 化 瓶 (四)砷盐的测定 碱融法破坏 湿法破坏 供 试? 品 有 ?? 机? ? 破?坏 A古 g?D 蔡D氏 法 C法 碱融法 供 ? C ? 试 ? ? O ? ? ? a 2 ? H 炭 品 ? 5 ? ? ~ 化 6 0 ? ? ℃ ? 0 0 灰 0 H+ AsO43? (五)残留农药的测定 1、 总氯量的测定 2、 总磷量的测定 3、 GC法 四、 含量测定项目的选定 中国药典中药制剂含量测定所占比例 版本 % 1977 1.48 1985 5.31 1990 8.73 2019 12.81 2000 62.09 (HPLC 36% TLCS 24% GC 3%) 测定项目的选定原则 1 首选君药及贵重药、剧毒药建立 含量测定方法 2 其次考虑臣药及其他味药 3 有效成分明确的,可选有效成分 4 成分类别清楚的,可测某一类总 成分的含量 5 检测成分应归属某单一药味 6 检测成分应与中医用药的功能主 治相近 7 确无法含量测定的,可测定浸出 物含量 化学分析法 常用定量方法 分光光度法 色谱法 (一)化学分析法 重量分析法 容量分析法 特点 A、准确度、精密度高 B、抗干扰能力差 例 昆明山海棠片 ? 样 ? 乙 ? ? 品 ? ? ? ? 醇 ? 滤 ? ? ? 液 残 ? H ? ? 渣 ? ? 称 ? ? 恒 ? ? 重 ? ? 重 ? ? ? 乙 ? ? ? ? ? N 醚 ? 3 ?? H ? 2 H O ? (二)分光光度法 UV法 比色法 特点 A、灵敏度高 B、简便、快速 C、精密度稍低 D、干扰多 小檗碱 ?m? a3x4 ,35 5 ,30 6 n0 m 芦丁 ?m? a 2,x 5 2,9 6 2,6 9 3n 9 5 黄芩苷 ?m? a 2x ,4 20 ,7 31 ,1 n4 m 丹皮酚 ?ma ?2 x7 n4m (三) TLCS法 测定薄层板上斑点对单色光的吸 收或反射的强度而进行定量的方法 特点 A、分离效果好 B、适用于无法用UV、HPLC 法测定的组分 C、准确度、精密度低于HPLC 2000年版中国药典(2000年版) 薄层扫描法品种 品种数量 TLCS数量 534(药材) 20 458(成药) 32 978(总数) 52 占总数% 3.74 6.99 10.73 1、 选择测定条件 (1)薄层色谱条件 分离好 不拖尾 (2)检测方法 吸收测定法 反射法 外标法 荧光测定法 透射法 内标法 (3)扫描方式 单波长 双波长 线性扫描法 锯齿扫描法 (4)散射参数SX 薄层板的散射使 A?ECL Kubelka-Munk方程 ?ddxi???S?K?i?Sj ?ddxj???S?K?j?Si 2、 注意事项 (1)薄层板 均匀、平整 (2)点样量 准确 (3)斑点 应完全分离,不拖尾 (4)显色剂 均匀、适当 (5)保护斑点 用相同大小洁净玻璃 盖住薄层板,并用透明胶纸封住边缘, 以起固定和隔绝空气作用 外标法(两点校正法) ×××× ×××××××× 样样对对 样样对对 样样对对 低高 低高 低高 (四) HPLC法 RP - HPLC 外标法和内标法 色谱柱 ODS 流动相 甲醇 - 水 PIC 反离子 氢氧化四丁基铵 RP - PIC 反离子 烷基磺酸盐 无机阴离子 离子对色谱法(PIC) 极性流动相中加入离子对试剂, 与被分析离子生成中性离子对,从而 增加在非极性固定相中的溶解度,使 分配系数增大 2000年版中国药典(2000年版) HPLC法品种 品种数量 HPLC数量 占总数% 534(药材) 54 10.11 458(成药) 48 10.48 978(总数) 102 20.59 应用实例-小青龙合剂 [处方] 生物碱 桂皮醛 芍药甙 麻黄125g 桂枝125g 白芍125g 干姜125 挥发油 五味子125g 细辛62g 甘草(蜜炙) 法半夏188g 三萜皂甙 NOTES:合剂是在传统汤剂基础上改进后的一种新剂型 应用实例-小青龙合剂 [制法] 以上八味,细辛、桂枝提取挥发油, 蒸馏后的水溶液另器收集,药渣与白芍、麻黄、 五味子、甘草加水煎煮至味尽,合并煎液,滤过, 滤液和蒸馏后的水溶液合并,浓缩至约1000ml。 法半夏、甘姜照流浸膏剂项下渗漉法,用70%乙 醇作溶剂,浸渍24小时后进行渗漉,漉液浓缩, 与上述药液合并,静置,滤过,滤液浓缩至 1000ml,加入苯甲酸钠3g与细辛、桂枝挥发油, 搅匀,即得。 [性状] 本品为棕黑色的液体;气微 香,味甜、微辛。 [功能与主治] 解表化饮,止咳平喘。 用于风寒水饮,恶寒发热,无汗, 喘咳痰稀。 [用法与用量] 口服,一次10-20ml, 一日3次,用时摇匀。 方药分析: 君 麻黄—发汗为君 臣 桂枝—解表为臣 佐 甘草—恐发汗太过, 佐以甘草缓 之 使 白芍、干姜、细辛、法半夏、五 味子—几药合力共为使。 可外发汗,内行水,散表里之邪。 汉代张仲景《伤寒论》——小青龙汤 近代由重庆桐君阁中药厂该汤剂为合 剂 本方治疗伤寒表不解,心下有水气, 干呕,发热而咳。近代也用于慢性 支气管炎,支气管哮喘、肺气肿, 均见咳、喘、痰白清稀者。 供试品溶液与阴性对照液的制备: 取合剂10 ml,石油醚分3次萃取, 合并石油醚萃取液[油层],浓缩至1ml, 为供试品溶液A; [水层]用Na2CO3调PH11-12,用氯仿萃取, 合并氯仿萃取液,回收氯仿至干,残渣 用1ml甲醇溶解,为供试品溶液B; NOTES:阴性对照液如上法同步进行。 1. 桂皮醛的鉴别 取供试品液A、阴性对照液、桂 皮醛对照液(1ug/ml)15ul,点于 同一硅胶G板上,环己烷-乙酸乙酯 (17:3)展开,晾干,喷2,4—二 硝基苯肼乙醇T.S,供试品A与对照 品在相应位置上显相同的橙色斑点, 而阴性对照液无此斑点。 2. 细辛挥发油的鉴别 取供试品液A、阴性对照液、细 辛挥发油对照液(1:10液) 5ul,点于同一硅胶G板上,环己烷 展开,晾干,喷10%香草醛浓硫酸 T.S,加热至显色,供试品A与对照 品在相应位置上显相同的粉红色斑 点,而阴性对照液无此斑点。 3. 麻黄碱的鉴别 取供试品液B,阴性对照液,麻黄 碱对照品液(1mg/ml)各5ul,点于 同一硅胶G,氯仿-甲醇-浓氨水 (20:5:0.5)展开,晾干,喷茚三 酮T.S,加热至斑点显色,供试品B 与对照品在相应位置上显相同的蓝紫 色斑点,而阴性对照液无此斑点。 取合剂5ml,上聚酰胺柱,DW 洗脱,洗脱液水浴浓缩至干,用 1ml甲醇溶解,为供试品溶液C; 聚酰胺柱再用95%乙醇洗脱, 弃取洗脱液,用3M氨乙醇液洗脱, 收集洗脱液水浴蒸干, 1ml甲醇溶 解,为供试品溶液D。 4. 芍药甙的鉴别 取供试品液C、阴性对照液、芍 药甙对照液(1mg/ml)10ul,点于同 一硅胶G板上,氯仿-乙酸乙酯-甲醇冰醋酸-甲酸(8:1:2:0.04)展开, 晾干,喷10%硫酸乙醇液,加热至显 色,供试品C与对照品在相应位置上 显相同的紫色斑点,而阴性对照液无 此斑点。 5. 甘草酸的鉴别 取供试品液D、阴性对照液、甘 草酸铵对照液(2mg/ml)2ul,点于 同一硅胶G板上,乙酸乙酯-甲酸-冰醋 酸-蒸馏水(30:2:2:4)展开,晾 干,喷10%硫酸乙醇液,加热至显色, UV灯365nm观察,供试品D与对照品 在相应位置上显相同的紫色斑点,而 阴性对照液无此斑点。 含量测定 HPLC法测定芍药甙的含量 ? 仪器与色谱条件 ? BECKMAN 332型高效液相色谱仪 ? 163型可变波长紫外检测仪,220nm ? 427型记录及数据处理仪 ? 色谱柱为YWGC18 ? 流动相乙腈-水(15:85) ? 标准曲线ml量瓶中,定容,分别吸取 0.50、1.00、1.50、2.00ml于10ml量瓶中定 容。 ? 回收率测定 精密吸取除去白芍制成的合剂 (即阴性对照液)0.3ml与适量芍药甙对照 品液,通过0.5g聚酰胺柱,用水洗脱至 50ml量瓶中至刻度,依前述条件测定,平 均回收率为99.42%,RSD为0.23%(n=3)。 ? 样品测定 取自制小青龙合剂摇匀,用滤 纸过滤,精密吸取0.3ml滤液通过 聚酰胺柱,以不同回收率测定条件 进行测定。 分析实例—万氏牛黄清心丸 [处方] 牛黄10g 朱砂60g 黄连200g 黄芩120g 栀子120g 郁金80g 分析实例—万氏牛黄清心丸 [制法]以上六味,除牛黄外,朱砂水 飞或粉碎成极细粉;其余黄连等四 味粉碎成细粉;将牛黄研细,与上 述粉末配研,过筛,混匀。每100g 粉末加炼蜜100-200g制成大蜜丸, 即得。 古方为糊丸,亦有水丸 [性状]本品为红棕色至棕褐色的大 蜜丸;气特异,味甜、微涩、苦。 [功能主治]清热解毒,镇惊安神。 用于热邪内闭,烦躁不安,神昏谵 语,小儿高热惊厥。 [方药分析] 本方来源于明.?痘疹世 医》心法 ,本方为清心开窍剂, 主治热邪内陷心包所致窍闭神昏症。 方中牛黄,清心解毒,豁痰开 窍为君药;黄连、黄芩、栀子清热 泻火,为臣药;朱砂清心,重镇安 神,郁金行气开窍共为佐使药,合 用以奏透邪泻热,开窍安神之效。 [方药分析] 牛黄—清热解毒药,主含胆酸类成分。 黄连—清热燥湿药,主要为小檗碱。 黄芩—清热燥湿药,主要为黄酮类。 栀子—清热泻火药,主含栀子甙。 朱砂—安神药,主含硫化汞(HgS)。 郁金—活血去瘀药,主含挥发油。 鉴别 ? 显微鉴别 郁金—糊化淀粉团块几乎无色。 栀子—种皮石细胞。 黄芩—纤维淡黄色,梭形,厚壁,孔沟细。 黄连—纤维鲜黄色,壁稍厚,纹孔明显。 朱砂—不规则块状物或颗粒状物,暗红棕色、 鲜红色或棕黄色。 郁金—糊化淀粉团 块 栀子—种皮石细胞 黄芩—纤维 黄连—纤维 朱砂—不规则块状 物或颗粒状物,暗 红棕色、鲜红色或 棕黄色 ? 化学鉴别 1. 朱砂的鉴别 取本品3g,加水适量,研匀,反复洗去悬浮 物,可得少量朱红色沉淀,取出,加入盐酸 1ml及铜片少量,加热煮沸,铜片由黄色变为 银白色。 HgS+2HCl+Cu?CuCl2+Hg+H2S NOTES:在酸性条件下,朱砂与铜片发生置 换反应析出金属汞,在铜片表面形成银白色汞 齐。 2. 人工牛黄的鉴别 取本品,剪碎,加硅藻土0.6g, 研匀,加氯仿10ml、冰醋酸0.5ml, 加热回流30min,放冷,滤过,滤液 蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,滤过, 滤液作为供试品溶液。 胆酸和猪去氧胆酸加乙醇制成 1ml含1mg的混合溶液,作为对照品 溶液。 TLC法 CMC-Na,硅胶G 展开剂 醋酸乙酯-正己烷-醋酸-甲醇 (32:6:1:1) 显色剂 10%磷钼酸乙醇液, 1100C,10min 猪去氧胆酸 胆 酸 人供 牛 工试 黄 牛品 空 黄 白 3. 黄芩的鉴别 供试品溶液的制备:取本品3g, 剪碎,加硅藻土0.5g,研匀,加甲 醇20ml,加热回流1hr,放冷,· 女排世界杯巴西3-2塞尔维亚 日本3-,滤过, 滤液作为供试品溶液。 对照品溶液的制备:黄芩甙对 照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液, 作为对照品溶液。 TLC法 CMC-Na,硅胶G (4%醋酸钠) 使斑点更为集中 展开剂 醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水 (5:3:1:1) 显色剂 2%三氯化铁乙醇液 -OH与Fe+3络合 黄 供 芩 试 空 品 白 黄 芩 甙 4. 栀子的鉴别 供试品溶液的制备:取本品3g,加乙 醚15ml,研磨,弃去。残渣挥干, 加醋酸乙酯30ml,加热回流1hr,放冷,滤 过,滤液蒸干,残渣加甲醇3ml溶解,滤过, 滤液作为供试品溶液。 对照品溶液的制备:栀子甙对照品加 甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品 溶液。 TLC法 CMC-Na,硅胶G 展开剂 醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水 (10 : 7 : 2 : 0.5) 显色剂 10%硫酸乙醇 1050C, 10min 栀 子 甙 供试 品 栀子空白 5. 黄连的鉴别 供试品溶液的制备:取含量测 定项下剩余的盐酸-甲醇提取液4ml, 水浴蒸干,残渣加甲醇溶解,使成 1ml作为供试品溶液。 对照药材溶液的制备:黄连对 照药材50mg,加甲醇10ml,回流加 热15min ,滤过,滤液蒸干,残渣加 甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液。 对照品溶液的制备:再取盐酸 小檗碱对照品,加甲醇制成每1ml含 0.5mg的溶液,作为对照品溶液。 TLC法 硅胶G CMC-Na 展开剂 苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨 试液(12:6:3:3:1) 显色剂 UV(365nm) 盐 酸 小 檗 碱 黄连 黄连空白 供公试式品品 含量测定 1. 朱砂 取本品约5g,剪碎,精密称定,置 250ml凯氏烧瓶中,加硫酸30ml与硝酸钾8g, 加热俟溶液至近无色,放冷,转入250ml锥 形瓶中,用水50ml分次洗涤烧瓶,洗液并 人溶液中,滴加1%高锰酸钾溶液至显粉红 色,两分钟内不消失,再滴加2%硫酸亚铁 溶液至红色消失后,加硫酸铁铵指示液2ml, 用硫氰酸铵滴定液滴定,即得。每1ml的硫 氰酸铵滴定液相当于11.63mg的硫化汞。 硫酸与硝酸钾—分解试样及有机破坏 高锰酸钾溶液—除去试样分解时产生的亚硫 酸 粉红色两分钟内不消失—亚硫酸可将Hg2+ 还原Hg+使含量变低,观察两分钟完全除 去亚硫酸 硫酸亚铁溶液—除去过量的高锰酸钾 滴定反应 Hg2+ +2CNS-→ Hg(CNS)2 显色反应 CNS-(过量)+Fe3+→ Fe(CNS)2+(红 色) 2.黄连 取本品约4g,剪碎,精密称定, 置索氏提取器,盐酸-甲醇(1:100)适 量,加热回流提取至提取液无色,提取 液移至50ml量瓶中,用盐酸-甲醇适量 稀释至刻度,摇匀,照柱色谱法,精密 量取5ml,上AL2OE311c%m柱,25ml洗脱,收集 洗液置50ml量瓶中,乙醇稀释至刻度, 精密吸取2ml置50ml量瓶中,加 0.05mol/L硫酸溶液稀释至刻度,摇匀。 UV345nm测定A。 E 1% 1cm 为728,本品含总 生物碱按盐酸小檗碱计不得少于1.7%。 黄连 方中臣药之首 用量最大 有效成分清楚 黄连有效成分为小檗碱,尚含 其它少量生物碱,如黄连碱、甲基 黄连碱、药根碱、巴马亭等,均为 原小檗碱型生物碱。 硫酸溶液 — 在酸性条件下,N 原子呈共轭体系的季铵状态,在 345nm处有最大吸收。其它五味药 的空白提取液在该波长处略有吸收, 约相当于0.3%小檗碱,因此测定结 果偏高。 本品为蜜丸制剂,其黄连生物碱溶 出速率较药材相对缓慢,回流至提 取液无色后应放置一段时间。